Penyediaan Contoh:
Koleksi sampel: Kumpulkan sampel seperti darah, tisu, air liur, dan air kencing mengikut tujuan eksperimen.
Pengekstrakan DNA: Gunakan kit pengekstrakan DNA khusus untuk mengekstrak DNA dari sampel.
Penyediaan tindak balas PCR:
Reka bentuk primer: Reka bentuk pasangan primer khusus berdasarkan urutan sasaran untuk penguatan DNA templat.
Sediakan campuran tindak balas: termasuk DNA templat, primer, penampan, polimerase DNA, DNTPS (deoxynucleoside triphosphates), mg 2+, dan sebagainya.
Tetapkan Program PCR:
Tetapan Instrumen PCR: Masukkan parameter kitaran PCR pratetap, seperti suhu pemanasan 95 darjah, suhu denaturasi (seperti 95 darjah), suhu penyepuhlindapan (seperti 55 darjah), suhu lanjutan (seperti 72 darjah), dan bilangan kitaran.
Reaksi PCR:
Tambah sampel: Tambah campuran tindak balas ke tangki atau cip reaksi PCR, dan setiap sampel biasanya mempunyai satu reaksi dengan baik.
Lakukan PCR: Kitaran instrumen PCR mengikut program pratetap, termasuk pemanasan, penyejukan, penyepuhlindapan, dan langkah lanjutan.
Analisis Produk:
Penyejukan selepas penguatan: Selepas PCR selesai, sampel disejukkan secara ringkas pada 4 darjah.
Pemisahan elektroforetik: Gunakan teknologi elektroforesis gel, seperti elektroforesis gel agarose, untuk memisahkan produk PCR dengan panjang yang berbeza.
Pengimbasan pendarfluor: Fluorescently berlabel primer memancarkan cahaya panjang gelombang tertentu dalam produk yang diperkuatkan, dan instrumen PCR membaca isyarat ini dan merekodkannya.
Pemprosesan data dan tafsiran:
Perisian Analisis Data: Gunakan perisian khusus untuk menganalisis isyarat pendarfluor dan mengira kepekatan atau kepekatan relatif serpihan sasaran.
Tafsiran Keputusan: Berdasarkan lengkung PCR dan garis dasar, tentukan sama ada PCR berjaya, sama ada serpihan sasaran wujud, dan berapa banyaknya.
Rakaman dan Pemeliharaan Keputusan:
Catat hasil dalam laporan eksperimen dan memelihara data dan sampel asal dengan betul.